亚洲av成人片色在线观看高潮,色欲人妻aaaaaaa无码,精品国产乱码久久久EA7 ,国产97在线 | 免费

當(dāng)前位置:
首頁 > 技術(shù)文章 > 大腸桿菌的分離鑒定與耐藥性分析
目錄導(dǎo)航 Directory
技術(shù)支持Article
大腸桿菌的分離鑒定與耐藥性分析
點擊次數(shù):1987 更新時間:2018-07-05

大腸桿菌的分離鑒定與耐藥性分析

  • 細菌分離純化:無菌采集肝臟劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基,伊美蘭瓊脂培養(yǎng)基中,37℃恒溫培養(yǎng)12-24h,用普通培養(yǎng)基進行純化培養(yǎng);
  • 細菌形態(tài)特征:無菌挑去上述純化培養(yǎng)菌,革蘭氏染色鏡檢

電鏡觀察:FQ-180菌液培養(yǎng)7h后,3000r/min離心5min,棄上清,ddH2O洗滌2次重懸,取15ul滴在Formver膜覆蓋在銅網(wǎng)上,2min后滴加磷鎢酸負染2min,待銅網(wǎng)烘干后,在投射電子顯微鏡下觀察

  • 生化試驗:將初步分離到的可疑菌落進行吲哚試驗,MR試驗,VP試驗,淀粉E試驗,枸櫞酸鈉利用試驗,乳糖、麥芽糖、蔗糖、木糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇發(fā)酵試驗,產(chǎn)硫化氫試驗,尿素酶試驗,觸酶試驗,運動性試驗,三塘鐵斜面穿刺試驗(或用ATB全自動生化鑒定系統(tǒng)和ID32E腸道菌鑒定試劑條進行生化試驗)
  • 藥敏試驗:按照美國臨床檢驗標準委員會(NCCLS)推薦的標準K-B紙片法進行實驗操作和結(jié)果判斷(所采用的抗生素見圖1)
  • 血清型鑒定:采用玻板凝集反應(yīng)對分離株進行血清型鑒定,先用多因子血清通過玻板凝集試驗篩選可能的血清型,然后再與大腸桿菌單因子血清各10ul在玻板上混勻,30S內(nèi)出現(xiàn)明顯凝集者為陽性反應(yīng),同時以菌液與0.5%碳酸生理鹽水混合物作對照,觀察有無自凝現(xiàn)象
  • PCR鑒定:將分離純化后的菌株按照煮沸法制備細菌DNA模板,以大腸桿菌phoA基因的特異性引物進行PCR鑒定
  • 毒力基因與耐藥性的關(guān)系:根據(jù)藥敏試驗的結(jié)果,針對藥敏性較為普遍的抗生素的耐藥基因情況,找出其規(guī)律,并研究獨立基因與耐藥性的關(guān)系,然后采用多重PCR方法檢測耐藥基因,如4種氨基糖苷類耐藥基因aadA1,aac2,aac4,aphA3;3種四環(huán)素類耐藥性基因tetA,tetC以及tetM的流行情況
  • 提取DNA及16s rDNA鑒定:提取細菌基因組DNA,并使用16s rRNA Bacterial Identification PCR kit的特異性引物進行擴增,后進一步對PCR擴增的DNA克隆、測序并開展序列分析
  • 致病性試驗:參照A.E.Williams等方法,設(shè)置16組試驗組,1組陰性對照,實驗組每株菌攻毒4只小組,按0.2ul/只腹腔注射菌液濃度為1*109ef/ml,對照組4只小鼠注射等劑量的生理鹽水,觀察發(fā)病及死亡情況,無菌采集死亡小鼠肝臟、心臟進行分離鑒定
  • 雞胚致死試驗:將待測大腸桿菌分別劃板,挑去平板上的單菌落,與LB液體培養(yǎng)基中37度搖床過夜培養(yǎng),然后離心,經(jīng)PBS洗2次,并用PBS懸液進行倍比稀釋,取0.1ml稀釋液經(jīng)尿囊腔接種12日齡SPF雞胚大約100-300CFU/只,每組10只,同時取0.1ml稀釋液涂板,做細菌計數(shù),對照分兩組,一組直射PBS,一組不注射,計每日死亡數(shù),質(zhì)4d,計胚胎致死率
  • 病毒分離:收集病樣加入青霉素(終濃度1000U/ml)和鏈霉素(終濃度1000U/ml),于4℃作用4h以上,取0.2ul接種于9-10日齡雞胚羊膜腔,37℃培養(yǎng)72h,4℃過夜后收集羊水,每份樣品接種3枚雞胚,采集的羊水用1%雞紅細胞進行血凝試驗,判斷病毒是否成功分離,如果標本呈陽性,采用血凝抑制試驗進一步堅定,標本呈陰性則繼續(xù)自傳3代

 

 

 

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號

欧美丰满熟妇多毛XXXXX| 55夜色66夜色国产精品视频| 精品国产三级a∨在线| 国产多P交换视频| 久久www香蕉免费人成| 国模少妇一区二区三区| 久久久99久久久国产自输拍| 人妻无码一区二区不卡无码av | 国产精品无码久久综合| 中文字幕人妻偷伦在线视频| 欧美老熟妇乱人伦人妻| 精品深夜av无码一区二区| 国产精品99无码一区二蜜桃| 免费精品无码av片在线观看| 2012手机免费观看版国语| 欧美性生交XXXXX久久久| 成人免费电影网站| 久久国产欧美日韩精品| 人妻 丝袜美腿 中文字幕| 久久人妻无码毛片A片麻豆| 亚洲一区二区三区AV无码| 亚洲乱码一区二区三区在线观看| 丰满人妻一区二区三区无码av| 无码国产精品一区二区免费式直播| 一区二区三区在线 | 欧洲| 欧美三级在线播放| 欧美老熟妇XB水多毛多| 又大又粗又爽a级毛片免费看 | 亚洲精品一区国产| 亚洲最大成人网| 永久免费av无码网站性色av| 国产欧美日韩精品a在线观看| 欧美另类VIVOX21老少配| 日本精品人妻无码免费大全| 国产亚洲精品久久久久久久久动漫 | 免费看男男gay啪啪网站| 国产精品一区二区久久乐下载| 欧美在线 | 亚洲| 日产国产精品亚洲系列| freexx性黑人大战欧美视频| 久久精品国产亚洲AV高清|