間充質(zhì)干細胞成脂誘導分化試劑盒
,成脂誘導液
貨號：YJ-MSCYD-004
價格： 1280.0
規(guī)格： 100ml 200ml
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品為團隊精心優(yōu)化的間充質(zhì)干細胞成脂誘導分化試劑盒，可增強間充質(zhì)干細胞向成脂細胞分化的能力。
本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。
產(chǎn)品組成成分及保存
試劑名稱 | 體積（100mL規(guī)格/200mL規(guī)格） | 保存條件及有效期 |
誘導分化添加劑Ⅰ | 5mL / 10mL | -20℃，1 Year |
誘導分化添加劑Ⅱ | 0.1mL / 0.2mL | -20℃，1 Year |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10mL / 20mL | -20℃，1 Year |
細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 85mL / 170mL | 4℃，1 Year |
油紅O染色液 | 5mL / 10mL | 4℃避光，1 Year |
注意：
1.為保證產(chǎn)品的有效性，請避免反復凍融。
2.配制好的誘導培養(yǎng)基保存于2-8℃，有效期為2周，請根據(jù)實驗用量合理配制。
產(chǎn)品使用說明
1. 成脂誘導分化完全培養(yǎng)基的配制
①室溫條件下融化各因子及血清。各因子融化后，瞬時離心，使溶液集中于離心管底部。（注意：若因子或血清中有沉淀物，屬正常現(xiàn)象，無須過濾，避免成分丟失。）
②根據(jù)實驗用量，于無菌操作臺中配制誘導分化完全培養(yǎng)基，建議每次配制50mL，配制比例見下表：
試劑成分 | 配制比例 | 50mL配制體系 |
誘導分化添加劑Ⅰ | 5% | 2.5mL |
誘導分化添加劑Ⅱ | 0.1% | 50uL |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10% | 5mL |
| 85% | 42.5mL |
2. 成脂誘導分化實驗步驟
①建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態(tài)良好的間充質(zhì)干細胞，將其消化下來，離心收集，使用含10%FBS的完全培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度，均勻鋪于培養(yǎng)瓶/板中，置于37℃5%CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（細胞接種詳情參考表二）
培養(yǎng)器皿 | 底面積 | 細胞量 | 培養(yǎng)液體積 |
24孔培養(yǎng)板 | 2cm/孔 | 2×105cell/孔 | 1mL/孔 |
12孔培養(yǎng)板 | 4.5cm/孔 | 4.5×105cell/孔 | 2mL/孔 |
6孔培養(yǎng)板 | 9.6cm/孔 | 9.6×105cell/孔 | 2mL/孔 |
T25培養(yǎng)瓶 | 25cm | 25×105cell | 5mL |
6cm培養(yǎng)皿 | 21cm | 21×105cell | 5mL |
10cm培養(yǎng)皿 | 55cm | 55×105cell | 10mL |
表二
②待細胞匯合度達80%~100%時，即可進行誘導分化。
③小心吸棄細胞培養(yǎng)上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導分化完全培養(yǎng)基，置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（注意：完全培養(yǎng)基加入細胞前需提前置于37℃預熱。）
④每2~3day換用新鮮的誘導分化完全培養(yǎng)基。換液時，若細胞培養(yǎng)上清顏色變?yōu)槌吻宓狞S色，是由于細胞量較大，培養(yǎng)基消耗較快導致的，請及時縮短換液周期。（注意：完全培養(yǎng)基加入前需提前置于37℃預熱。）
⑤細胞誘導3周后，即可進行油紅O染色鑒定。
3. 油紅染色分析
①細胞誘導分化結(jié)束后，小心吸棄細胞培養(yǎng)上清，1×PBS潤洗1~2次。加入適量細胞固定液，室溫固定30 min。（細胞固定液為4%中性甲醛溶液等，體積參考表二）
②配制油紅O工作液：油紅O貯存液與蒸餾水按照3：2配制，（例：油紅O貯存液3mL，蒸餾水2mL），混勻。使用濾紙過濾，收集濾液，即為油紅O工作液。（注意：成脂細胞內(nèi)的油滴極易脫落，操作時須謹慎。）
③細胞固定完成后，吸棄細胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入適量油紅O工作液，室溫染色30min。（注意：油紅O工作液底部可能會有沉淀，吸取時盡量不要觸及底部。若細胞染色后有沉淀，PBS洗去即可。）
④吸出染色液，PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果。細胞內(nèi)油滴著色，呈紅色。（注意：油紅O工作液不可重復使用，不建議回收。）
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