脲酶（UE）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意：正式測(cè)定之前選擇預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

 規(guī)格：100T/48S 產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存，臨用前加3mL蒸餾水充分溶解； 試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存；

試劑三 A 液：液體 0.4mL×1 支，4℃保存；

試劑三 B 液：液體 1.6mL×1 瓶，4℃保存；臨用前將 A 液倒入 B 液中混合，待用； 試劑四：液體 2mL×1 瓶，4℃保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，4℃保存。1mg/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說(shuō)明：

微量法

脲酶（UE）廣泛分布于植物的種子中，也存在于動(dòng)物的血液和尿液中，某些微生物也能分泌脲酶。UE能夠水解尿素產(chǎn)生氨和碳酸，對(duì)尿素轉(zhuǎn)化起關(guān)鍵作用。利用靛酚藍(lán)比色法測(cè)定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH3-N來(lái)反應(yīng)UE活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、研缽/勻漿器、低溫離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

操作步驟： 一、樣品處理

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5-10  的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液），冰上勻漿后于4℃，12000g 離心15min，取上清待測(cè)。

• 細(xì)胞/細(xì)菌：按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500-1000：1 的比例（建議500 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率300w，超聲3 s，間隔7 s，總時(shí)間3min）； 然后4℃，12000g 離心15min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血清（漿）或其它液體：直接檢測(cè)。二、測(cè)定操作：

1、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，波長(zhǎng)調(diào)至 630nm，可見(jiàn)分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2、將 1mg/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋至 2µg/mL 備用。

3、加樣表：

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三、計(jì)算公式：

1、液體中UE活力的計(jì)算：

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘產(chǎn)生1µg NH₃-N定義為一個(gè)酶活力單位。

UE（U/mL）=?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V酶促÷V樣÷T

=0.233×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)。

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中UE活力的計(jì)算：

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1µg NH₃-N定義為一個(gè)酶活力單位。

UE活力（U/mg prot）=?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V酶促÷(V樣×Cpr)÷T

=0.233×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr。

（2） 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1µg NH₃-N定義為一個(gè)酶活力單位。

UE活力（U/g鮮重）=?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V酶促÷(W× V樣÷V提取)÷T

=0.233×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W。

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1百萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1µg NH₃-N定義為一個(gè)酶活力單位。

UE活力（U /106 cell）=?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V酶促÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V提取) ÷T

=0.233×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量。

C標(biāo)準(zhǔn)液：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，2µg/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，60min；V酶促：酶促反應(yīng)體系總體積，0.14mL；

V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V提?。禾崛∫后w積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；

W：樣本質(zhì)量，g；細(xì)胞數(shù)量：以百萬(wàn)計(jì)。注意事項(xiàng)：

1. ?A測(cè)定大于0.6時(shí)，建議將反應(yīng)混合液用蒸餾水稀釋或者樣品用蒸餾水稀釋后在進(jìn)行測(cè)定。

人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUV-EC)培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)