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ELISA試劑盒洗板方法和操作步驟你知道有哪些嗎?
更新時(shí)間:2020-11-14 點(diǎn)擊次數(shù):5160次
  ELISA試劑盒是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。
  ELISA試劑盒工作原理:
  1、抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。
  2、結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。
  3、酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
  4、受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。
  5、此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
  6、加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
  ELISA試劑盒洗板方法:
  1、手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
  2、自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
  ELISA試劑盒操作步驟:
  1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
  3、樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
  4、除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5、棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
  6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7、每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號(hào)

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