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葡聚糖凝膠(G-15)的洗脫方法你知道嗎?
更新時(shí)間:2021-08-25 點(diǎn)擊次數(shù):5669次
  葡聚糖凝膠(G-15)分離適用于天然產(chǎn)物在有機(jī)溶劑中的純化。例如:類固醇、萜類、脂類以及小分子多肽等,葡聚糖凝膠(G-15)同時(shí)適用于分子類別非常相似的物質(zhì)的分離和工業(yè)規(guī)模的制備,既可用于初步純化步驟,也可以用于zui終精制步驟。
  葡聚糖凝膠(G-15)分離方法:
  1. 乙醇浸泡:在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時(shí),并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無(wú)鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
  2. 無(wú)鹽水浸泡:室溫下,在無(wú)鹽水中充分溶脹24小時(shí),間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹,然后;
  3. 鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時(shí),間隙攪拌,濾干,水洗只中性;
  4. 將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層;
  5. 上樣前平衡層析柱至少3-5 個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值);
  6. 凝膠過(guò)濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20% 的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱高控制在40-50cm以下,過(guò)高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時(shí)高徑比為5:1 即可;
  7. 洗脫方法:可以用無(wú)鹽水,也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫;在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*讓葡聚糖凝膠(G-15)分離純化;
  8. 在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氫氧化鈉反向洗四個(gè)柱體積,再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。

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